大鼠血管生成素-1(Angiopoietin-1)ELISA试剂盒 说明书

来自 : 发布时间：2024-05-09

上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 大鼠血管生成素-1(Angiopoietin-1)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Angiopoietin-1 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Angiopoietin-1与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠Angiopoietin-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，Angiopoietin-1浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Angiopoietin-1浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）准备试剂与收集血样1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清可能需要稀释,请先做预实验,以确定稀释倍数。2. 标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成4000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液200ul。在第一管中加入4000pg/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出200ul弃去。第八管为空白对照。3. 10 标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4. 洗板：同前。5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6. 洗板：同前。7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。8. 每孔加入100ul终止液混匀。9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。2. 以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Angiopoietin-1含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能 1. 灵敏度：最小的Angiopoietin-1 检测浓度小于16pg/ml。2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠Angiopoietin-1。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。4. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639www.westang.com , westang@163.com